新闻中心
热销产品
您现在的位置:首页 > 新闻中心 > 行业新闻行业新闻

应该如何去做定量PCR的实验

作者:标准菌株生产厂家 来源:www.njlezhen.com 发布于:2018-6-21 10:54:31 点击量:

   在定量PCR试验的时候要是扩增曲线的数值比较低该如何解决呢?如果扩增曲线数值较低就会对实验起到阻碍的作用,因为PCR在反复多次测试后扩增曲线的移动速率就会变低,所以我们应该通过溶液稀释来提高扩增曲线值.下面乐诊cmcc菌种生产厂家为您进行具体的讲解

 
  为什么合成的引物做不加摸板的对照也能扩增出目的条带,而内参用同样体系就没有呢?引物被污染.实时定量PCR,荧光定量PCR,实时荧光定量PCR,real-timePCR,这些是不是同一个概念?是一个概念.
 
 
  我的标准曲线的slope总是大于4,而且每个梯度的平行ct值差别比较大的原因?这个斜率是=1/LOG10,理论上扩增效率=2,斜率是3.322.如果斜率大于4,说明扩增效率比较小.可以考查一下反应体系是否合理?酶活是否正常?平行管的CT值差别大可以考查一下自己实验操作是否规范,另外一种原因就是仪器本身的误差也可能会导致CT值差别比较大.
 
 
  当斜率为4的时候,扩增效率是77.8%,斜率大于4的话,效率继续下降.扩增效率的问题实际就是引物的扩增效率,可能酶活的关系没有那么重要,前提是试剂盒的质量有保证.回到扩增效率,只有在引物和模板处于最适比例时才能得到比较满意的扩增效率,因此通过调节PCR反应体系中的引物终浓度来解决,可以做一些引物梯度来比较.



上一篇:亚克隆的实验原理及操作方法

下一篇:检验药品微生物的具体流程

乐诊首页 - 关于乐诊 - 新闻中心 - 产品中心 - 下载中心 - 会员中心 - 招聘招商 - 技术支持 - 联系我们

版权所有 南京乐诊生物技术有限公司 www.njlezhen.com 地址:南京江宁东山天印大道880号 网站地图 公司主要从事微生物培养基的研发和销售。

在线客服

一大区
点击这里给我发消息
二大区
点击这里给我发消息
三大区
点击这里给我发消息
四大区
点击这里给我发消息
五大区
点击这里给我发消息
技术支持
点击这里给我发消息