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营养琼脂有哪些用途

作者:标准菌株生产厂家 来源:www.njlezhen.com 发布于:2015-3-10 13:49:24 点击量:

培养基名称:营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)

品种编号:022020

培养基英译名称:Nutrient Agar

培养基规格: 250g

营养琼脂(用途:用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养,也可用于消毒效果测定。

营养琼脂使用原理

蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。

配方(每升):

蛋白胨10g

牛肉膏粉3g

氯化钠 5g

琼脂15g

最终pH 7.3±0.2

 

营养琼脂(使用方法

1、称取营养琼脂(33g,加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装三角瓶,121℃高压灭菌15min,备用。

2、(食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL),放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠),充分振摇,即为1:10的均匀稀释液。依次做1:100,1:1000……稀释液。

3、根据对样品污染情况的估计,选择2—3个合适的稀释度,分别在做10倍稀释的同时,吸取1mL稀释液于灭菌平皿中,每个稀释度做2个平皿。

4、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL,并转动平皿使混合均匀,同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。待琼脂凝固后,倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。

5、观察结果。

6、菌落计数方法:

做平板菌落计数时,可用肉眼观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏,在计下各平板的菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌落总数。

7、菌落计数的报告:

选取菌落数在30—300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板,应采用两个平板平均数,其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。平皿内如有我链状菌落生长时(菌落之间无明显界线),若仅有一条链,可视为一个菌落;如有不同来源的几条链,则应将每条链视为一个菌落计

A:稀释度的选择:

应选择平均菌落数在30—300之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之。

若有两个稀释度.其生长的菌落数无均在30—300之间,则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2,则应报告其平均数;若大于2则报告其较小的数字。

若所有稀释度的平均菌落数均大于300则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最底的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1乘以最底稀释倍数报告之。

若有稀释度的平均菌菌落数均不在30—300之间,其中一部分大于300或小于30时,则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

 

菌落数的报告

菌落数在100以内时,按其实有数报告,大于100时,采用二位有效数字,在二位数字后面的有效数值,以四舍五入法计算。为了缩短数字后面的零数,也可以用10的指数来表示。

稀释度选择及菌落数报告方式

例次稀释液及菌落数两稀释液之比菌落总数个/g或mL报告方式个/g或mL

10-110-210-3

1多不可计16420——16 40016 000或1.6×104

2多不可计295461.637 7503 8000或3.8×104

3多不可计271602.2 ——27 10027 000或2.7×104

4多不可计多不可计313 ——31 300 31 0000或3.1×105

527115 ——270270或2.7×102

6 000 ——<1×10<10

7多不可计30512——30 500 31 000或3.1×104

 

质量控制

本品接种下列菌株,置于36±1℃温箱中培养48±2h,结果如下:

菌 名菌 号 生长状况 菌落特征

大肠埃希氏菌ATCC25922良好白色—灰白色,圆形,边缘整齐,表面光滑,湿润。

金黄色葡萄球菌ATCC6538 良好 黄色,圆形,边缘整齐,表面光滑、湿润,不透明。

营养琼脂贮存方法:贮存于避光、阴凉干燥处,用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。




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