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保存微生物菌种的注意事项与冷冻技术

作者:标准菌株生产厂家 来源:www.njlezhen.com 发布于:2018-5-14 14:56:05 点击量:

    有些微生物是有利于研究人员做研究的,所以需要将这些微生物菌种好好的保存起来。保存这些微生物一般是运用的冷冻技术,首先需要对盛放微生物菌种的仪器进行杀菌和消毒处理,避免这种微生物与其他微生物混合在一起,饭后将培养皿放于低温状态下保存。
 


    取0.1~0.2ml菌体悬浮液,移植于适宜的琼脂斜面、平板培养基上,剩余的菌液,注入适宜的液体培养基内,然后在建议的温度下培养。若未能活化,或活化后有疑问时,请于收到菌种1个月内,通知保藏中心,经查证无误后,即免费补寄。

    注意事项:菌种活化前,请将安瓿管保存在6一10℃的环境下。厌氧菌的培养,如无特别说明,自开封至接种完成,均需以无氧气体充填,以保持厌氧状态。某些菌种经过冷冻干燥保存后,延迟期较长,需连续两次继代培养才能正常生长,此时请将步骤二重复一次。

    液氮超低温保藏程序:容器的选择:使用带螺旋盖的2ml塑料安培瓶。检查安培瓶是否渗漏:用0.05%的亚甲基蓝水溶液在4℃浸泡30-45分钟,冲洗干净,弃去含有蓝色染料的安培瓶,其余的安培瓶备用。容器的灭菌:先用蒸馏水漂洗干净安培瓶,再用蒸馏水在灭菌锅中121℃浸泡灭菌15分钟,干燥并将打印好的标签放入安培瓶中,略拧紧螺旋盖,再行121℃灭菌30分钟。

    保藏菌菌龄:处于最大生长量阶段或对数生长期后期。保护剂:选用5-10%的甘油或二甲基亚砜作保护剂。甘油的准备:在121℃灭菌15分钟,2-8℃贮存。甘油一般以两倍最终所需浓度的水溶液保存,然后与同等量的细胞悬液混合。若不用细胞悬液,则以最终所需浓度的水溶液保存。

    二甲基亚砜:用0.22um的聚四氟乙烯过滤膜过滤除菌。过滤膜预先用甲醇和二甲基亚砜漂洗。无菌的二甲基亚砜以10-15ml装量2-8℃避光保存。分装:在无菌条件下,将细胞悬液分装于安培瓶中,并注入保护剂,拧紧螺旋盖。




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