消毒与灭菌的方法
灭菌是用物理或化学的方法来杀死或除去物品上或环境中的所有微生物。消毒是用物理或化学的方法杀死物体上绝大部分微生物 ( 主要是病原微生物和有害微生物 ) 。消毒实际上是部分灭菌。
在微生物实验、生产和科研工作中，需要进行纯培养，不能有任何杂菌，因此，对所用器材、培养基要进行严格灭菌，对工作场所进行消毒，以保证工作顺利进行。
消毒与灭菌的方法很多，一般可分为加热、过滤、照射和使用化学药品等方法。
1 、加热法
加热法又分干热灭菌和湿热灭菌两类。
1 ）干热灭菌
有火焰烧灼灭菌和热空气灭菌两种。火焰烧灼灭菌适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，无菌操作时的试管口和瓶口也在火焰上作短暂烧灼灭菌。通常所说的干热灭菌是在电烘箱内灭菌，此法适用于玻璃器皿如吸管和培养皿等的灭菌，在热空气 160 ℃ -170 ℃下保温 2 小时进行灭菌。
2 ）湿热灭菌
⑴高压蒸汽灭菌法 此法是将物品放在高压蒸汽灭菌锅内 1.05kg ／ cm 2 (15 磅 / 英寸 2 ) ， 121.3 ℃保持 15-30 分钟进行灭菌。时间的长短可根据灭菌物品种类和数量的不同而有所变化、以达到彻底灭菌为准。这种灭菌适用于培养基、工作服、橡皮物品等的灭菌。
⑵间歇灭菌法 有少数培养基例如明胶培养基、牛乳培养基、含糖培养基等用干热灭菌和高压蒸汽灭菌均会受到破坏，则必须用间歇灭菌法。此法是用阿诺氏流动蒸汽灭菌器进行灭菌。该器底层盛水，顶部插有温度计，加热后水蒸汽温度达到 100 ℃时，即循环流于器内，水蒸汽碰到器内物体时，又凝成水，流至底层贮水处，故不至干涸。灭菌时，将培养基放在器内，每天加热 100 ℃ 30 分钟、连续三天，第一天加热后，其中的营养体被杀死，将培养基取出放室温下 18-24 小时，使其中的芽孢发育成为营养体，第二日再加热 l00 ℃ 30 分钟，发育的营养体又被杀死，但可能仍留有芽孢，故再重复一次，使彻底灭菌。一般凡能用高压蒸汽灭菌的物品均不采用此法灭菌。
⑶煮沸消毒法 注射器和解剖器械等可用煮沸消毒法。一般微生物学实验室中煮沸消毒时间为 10-15 分钟，人用注射器和手术器械在有条件的地方，一般均采用高压蒸汽灭菌法或干热灭菌法灭菌。
2 、过滤灭菌
许多材料例如血清与糖溶液应用一般加热消毒灭菌方法，均会被热破坏，因此，采用过滤除菌的方法。应用最广泛的过滤器有蔡氏 (Seitz) 过滤器和膜过滤器。蔡氏过滤器是用银或铝等金属做成的，分为上、下两节、过滤时，用螺旋把石棉板紧紧地夹在上、下两节滤器之间，然后将溶液置于滤器中抽滤。每次过滤必须用一张新滤板。滤膜过滤器的结构与蔡氏过滤器相似，只是滤膜是一种多孔纤维素 ( 乙酸纤维素或硝酸纤维素 ) ，孔径一般为 0.45 m m ，过滤时，液体和小分子物质通过，细菌被截留在滤膜上，但若要将病毒除掉，则需更小孔径的滤膜。
3 、紫外线灭菌
紫外线波长在 200-300nm ，具有杀菌作用，其中以 265-266nm 杀菌力最强。无菌室或无菌接种箱空气可用紫外线灯照射灭菌。
4 、化学药品灭菌
化学药品消毒灭菌法是应用能杀死微生物的化学制剂进行消毒灭菌的方法。实验室桌面、用具以及洗手用的溶液均常用化学药品进行消毒灭菌。常用的有 2% 煤酚皂溶液 ( 来苏尔 ) 、 0.25% 新洁尔灭、 1% 升汞、 3-5% 的甲醛溶液、 75% 酒精溶液等
