将加好棉塞的试管4～5支捆扎好，用牛皮纸（或两层报纸）包住管（瓶）口，然后灭菌，做平板培养基要用的培养皿等，要事先洗净、烘干、包装好，进行干热灭菌。
试管培养基灭菌后，要趁热斜放。先在桌上放一长木板条，然后逐个摆放，使培养基斜面长度为试管长度的2/5至3/5，冷凝后即成斜面培养基。三角瓶中的培养基可趁热倒入已灭菌的培养皿中，制作平板培养基。方法是：将培养基冷却至45～50℃（低于45℃易凝固，应在水浴锅中加热融化），左手拿培养皿，右手拿三角瓶底部，用左手小指和手掌将三角瓶口的棉塞拔下，并握在手中，灼烧瓶口片刻，在酒精火焰旁将培养皿打开一小缝，使瓶口正好伸入，倾入培养基约15mL，平置、凝固即成。注意：操作者事先必须洗净手，并用70%酒精消毒。
